ATCC細(xì)胞庫(kù)通常保存在凍存管中用干冰運(yùn)輸，或是在培養(yǎng)瓶中常溫運(yùn)輸。但對(duì)于國(guó)內(nèi)客戶，由于運(yùn)輸時(shí)間稍長(zhǎng)，都是采用干冰運(yùn)輸?shù)姆绞?。在收到ATCC細(xì)胞后，很重要的一點(diǎn)是迅速解凍使其立即復(fù)蘇并除去DMSO，然后將它們放置到培養(yǎng)基中。如果做不到上面這點(diǎn)，需將細(xì)胞存儲(chǔ)在液氮中（-130℃以下）。不要將凍存細(xì)胞儲(chǔ)存在高于-130℃的溫度下，這會(huì)使細(xì)胞存活率迅速下降。

 

　　ATCC細(xì)胞庫(kù)的使用方法：

　　1、您收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作：

　　取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置4-6小時(shí)或隔夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。然后，用75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，收集瓶?jī)?nèi)液體于50ml離心管中，1000rpm離心5min，棄上清，用6ml培養(yǎng)基重懸，全部接種到25cm2培養(yǎng)瓶中，再放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。如果離心后細(xì)胞量很多，可以直接1:2分瓶培養(yǎng)。

 

　　2、細(xì)胞傳代：細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的85%及以上面積時(shí)，收集瓶?jī)?nèi)液體于15ml離心管中，1000rpm離5min，棄上清，用12ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，按1:2的比例進(jìn)行接種傳代，接種到25cm2培養(yǎng)瓶中，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，2-3天更換培養(yǎng)液。換液的步驟同細(xì)胞NK-92細(xì)胞，ATCC細(xì)胞，培養(yǎng)技術(shù)傳代步驟。

 

　　3、細(xì)胞凍存：

　?、偌?xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的85%及以上面積時(shí)，收集瓶?jī)?nèi)液體于15ml離心管中，1000rpm離心5min，棄上清，用適當(dāng)量的凍存液（基礎(chǔ)培養(yǎng)基：FBS：DMSO=5:4:1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中。

　?、谙葘⒓?xì)胞凍存管放置于4℃0.5h，再放置于-20℃1.5h，然后將其移入-80℃隔夜，24h后可轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。

 

　　4、細(xì)胞復(fù)蘇：

　　①?gòu)囊旱腥〕黾?xì)胞凍存管，快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁。

　?、趯龃婀苤械募?xì)胞移至含有5ml培養(yǎng)液的15ml離心管中，然后1000rpm/min，離心5min。

　　③棄上清，沉淀細(xì)胞用6ml培養(yǎng)基重懸，接種到培養(yǎng)瓶中，zui后放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

　　④第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。