歡迎您,來到青旗(上海)生物技術發(fā)展有限公司!
Product category
Related articles
簡要描述:BJ5183化學感受態(tài)細胞BJ5183是一種具有較高重組活力的大腸桿菌菌株,是目前腺病毒系統(tǒng)常用的感受態(tài)細胞。BJ5183菌株含有sbcBC recBC雙重突變,賦予BJ5183細胞較強的重組能力,有利于轉入的目的基因與腺病毒質粒{pAdeasy-1或pAdeasy-2的重組。
更新時間:2022-01-18
廠商性質:生產廠家
瀏覽次數:547
品牌 | 其他品牌 | 貨號 | BFNC86020 |
---|---|---|---|
規(guī)格 | 10x100ul/50x100ul | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 僅用于科研 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產業(yè) |
BJ5183化學感受態(tài)細胞
產品規(guī)格CAT#: BFNC86020-01(10×100ul)/BFNC86020-02(50×100ul)
BJ5183: 100μl/支
pUC19 (control vector,10pg/μl): 10μl
保存條件(保質期): -80℃(6個月)
基因型
產品說明
BJ5183是一種具有較高重組活力的大腸桿菌菌株,是目前腺病毒系統(tǒng)常用的感受態(tài)細胞。BJ5183菌株含有sbcBC recBC雙重突變,賦予BJ5183細胞較強的重組能力,有利于轉入的目的基因與腺病毒質粒{pAdeasy-1[encodes the Adenovirus-5 genome (E1/E3 deleted)]或pAdeasy-2[encodes the Adenovirus-5 genome (E1/E3/E4 deleted)]}的重組。endA1(缺失核酸內切酶)的突變有利于重組DNA的穩(wěn)定和高純度質粒DNA的提取。StrR 賦予BJ5183菌株鏈霉素抗性。
青旗生物生產的BJ5183感受態(tài)細胞經特殊工藝制作,pUC19質粒檢測轉化效率>5×108 cfu/μg DNA。
BJ5183化學感受態(tài)細胞
操作方法
1. BJ5183感受態(tài)細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的質粒(含有目標基因并線性化)和腺病毒質粒,并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。
3.向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。
注意事項
1. 感受態(tài)細胞適宜在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間
存放會降低轉化效率。
2. 混入目的DNA時應輕柔操作。
3. BJ5183菌株的質粒產量不高。腺病毒構建成功后,可選擇在其他大腸桿菌菌株中擴繁,純化質粒。
4. BJ5183感受態(tài)細胞對溫度敏感,應儲存在-80℃超低溫冰箱,避免溫度波動,溫度波動會降低感受態(tài)轉化效率。