DH5α電轉感受態(tài)細胞

產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86035-01(5×50ul)/BFNC86035-02(20×50ul)

DH5α Electroporation-Competent Cell                  50μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                                10μl

保存條件(保質期)：                                         -80℃（6個月）

基因型

F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(r_k^-,m_k⁺) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA

產(chǎn)品說明

DH5α電轉感受態(tài)細胞只能用于電擊轉化，不能用于熱激轉化。DH5α菌株是實驗室常用的感受態(tài)細胞。 缺失核酸內(nèi)切酶 (endA)，提高了質粒DNA的產(chǎn)量和質量；重組酶缺陷型 (recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA 的穩(wěn)定性；lacZΔM15的存在使DH5α可用于藍、白斑篩選。

青旗生物生產(chǎn)的DH5α電擊感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率可達1×10¹⁰ cfu/μg DNA。

DH5α電轉感受態(tài)細胞

操作方法

1. 0.1cm 電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘，待其瀝干水分，正置5分鐘，使乙醇充分揮發(fā)，待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中，壓實冰面，電極杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5分鐘充分降溫。

2. 取-80℃保存的DH5α電擊感受態(tài)細胞插入冰中5 分鐘，待其融化，加入目的DNA (質粒或連接產(chǎn)物)并用手bo打EP管底輕輕混勻，避免產(chǎn)生氣泡，立即插入冰中。

A. 測定轉化效率使用1 μl 10 pg/μl的對照質粒 pUC19；

B. 對于連接產(chǎn)物，請用乙醇沉淀DNA后加入適量TE緩沖液 (10mM Tris HCl, pH7.5; 1mM EDTA)重懸，DNA濃度不超過100ng/μl，體積不超過5μl/50μl 感受態(tài)。

3. 用200 μl槍頭將感受態(tài)-DNA混合物快速移到電擊杯中，避免產(chǎn)生氣泡，蓋上杯蓋。

4. 啟動電轉儀，設置參數(shù)：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此為BioRad 電轉儀推薦參數(shù)，也可按所用電轉儀推薦的參數(shù)操作），將電擊杯快速放入電轉槽中，電擊完成快速插入冰中。

5. 2分鐘后從冰中取出電擊杯，放室溫，加入700 μl不含抗生素的無菌S.O.C. 培養(yǎng)基（室溫），用1ml槍吹吸電擊杯底部數(shù)次混勻后，轉移到50ml離心管（BD Falcon50ml錐形離心管等），向離心管中補加S.O.C. 培養(yǎng)基至5ml。37℃，225 rpm復蘇60分鐘。

6. 5000rpm離心一分鐘收菌，重懸后取100-200 μl涂布到含相應抗生素的S.O.C平板上（因菌量較大，若全部涂板請選用直徑15cm培養(yǎng)皿2-5個）。將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)13-17小時。

S.O.C 培養(yǎng)基配方

2% Tryptone

0.5% Yeast Extract

10 mM NaCl

2.5 mM KCl

10 mM MgCl2

10 mM MgSO4

20 mM glucose

PH-7.0

S.O.C. Medium is suitable for use in the final step of cell transformation to obtain maximal transformation efficiency of E. coli (Hanahan, 1983).

注意事項

1. 加入DNA時體積不應大于感受態(tài)體積的1/10。

2. 電擊感受態(tài)細胞加入電擊杯應避免產(chǎn)生氣泡，氣泡會增加弧光放電風險。

3. 當DNA不純或存在鹽，乙醇，蛋白及緩沖液等污染時，轉化效率急劇下降。

4. 電擊杯里的離子可增加溶液的電導，增大在含有細胞和DNA的溶液中產(chǎn)生電流和弧光放電的風險。

5. 若轉化大質?；蛳氆@得較高轉化效率，推薦使用高純質粒提取試劑盒提取質粒。質粒增大一倍，轉化效率下降一個數(shù)量級。

6. 對于連接產(chǎn)物轉化，請轉化前乙醇沉淀DNA后用適量TE緩沖液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重懸產(chǎn)物，保證DNA濃度不超過100 ng/μl。過高濃度連接產(chǎn)物或過大體積連接產(chǎn)物會降低轉化效率，增加弧光放電的風險。

7. 混入質粒時應輕柔操作，吸取感受態(tài)細胞時不可用孔徑過小的槍頭 (普通200ul槍頭應剪去槍頭尖0.6cm) 避免用力過猛，以免剪切力過大損傷細胞膜，降低轉化效率。轉化高濃度的質?；蜻B接產(chǎn)物可相應減少終用于涂板的菌量。

8. 電擊感受態(tài)細胞盡量保存在-80℃以下，高于-80℃超期儲存會導致轉化效率會下降。