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簡要描述:Rosetta-gami 2(DE3)感受態(tài)細胞兼具Rosetta 2 和 Origami 2 兩種菌株的優(yōu)點。
更新時間:2022-01-20
廠商性質:生產(chǎn)廠家
瀏覽次數(shù):731
品牌 | 其他品牌 | 貨號 | BFNC8676 |
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規(guī)格 | 10x100ul/50x100ul | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 僅用于科研 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
Rosetta-gami 2(DE3)感受態(tài)細胞
產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86076-01(10×100ul)/BFNC86076-02(50×100ul)
Rosetta-gami 2(DE3): 100μl/支
pUC19 (control vector,10pg/μl): 10μl
保存條件(保質期): -80℃(6個月)
基因型
D(ara-leu)7697 DlacX74 DphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL (DE3) F’[lac+ lacIq pro] gor522::Tn10 trxB pRARE2 (CamR, StrR, TetR)
產(chǎn)品說明
Rosetta-gami 2(DE3) 菌株集合了Rosetta 2 和 Origami 2 兩種菌株的優(yōu)點:
* pRARE2賦予其Rosetta2菌株的優(yōu)點——補充大腸桿菌缺乏的7種稀有密碼子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA和CGG)對應的tRNA,提高外源基因的表達水平。
* gor522::Tn10 trxB賦予其Origami2菌株的優(yōu)點——突變的硫氧還蛋白還原酶(thioredoxin reductase) (trxB)和谷胱甘肽還原酶(glutathione reductase) (gor)基因,它們是還原途徑的兩個關鍵酶,其突變有利于高效形成正確折疊的含有二硫鍵的蛋白,增強蛋白的可溶性;同時該菌株不具有卡那霉素抗性,可用于具有卡那霉素抗性質粒的蛋白表達。
* 該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū) (DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶)適合T7啟動子誘導的蛋白表達。
* Rosetta-gami 2(DE3)菌株具有氯霉素,鏈霉素,四環(huán)素抗性,由特殊工藝制作,經(jīng)pUC19質粒檢測轉化效率高達108 cfu/μg DNA。
操作方法
1. Rosetta-gami 2(DE3)菌株感受態(tài)細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含所選質粒篩選抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。
Rosetta-gami 2(DE3)感受態(tài)細胞
IPTG
Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.
注意事項
1. 感受態(tài)細胞盡量在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。
2. 混入質粒時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質??上鄳獪p少終用于涂板的菌量。
4. 誘導時,IPTG濃度可選(0.1-2 mM均可)。
5. 為獲得需要量的蛋白,誘導時間,溫度,IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。