ArcticExpress (DE3) pRARE2感受態(tài)細胞

產品規(guī)格CAT#: BFNC86091-01(10×100ul)/BFNC86091-02(50×100ul)

ArcticExpress (DE3) pRARE2：                         100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                           10μl

保存條件(保質期)：                                   -80℃（6個月）

基因型

E. coli B F– ompT hsdS(rB– mB–) dcm+ Tet^R gal λ(DE3) endA Hte [cpn10cpn60 Gent^R] pRARE2 (Cam^R)

產品說明

ArcticExpress (DE3) pRARE2來源于ArcticExpress (DE3)，將具有氯霉素抗性的pRARE2質粒導入ArcticExpress (DE3)細胞中即是ArcticExpress (DE3) pRARE2。ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株染色體DNA中整合了λ噬菌體DE3區(qū)，使得ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株可同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，廣泛用于pET系列，pGEX，pMAL等質粒的蛋白表達。ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株具有四環(huán)素，慶大霉素，氯霉素抗性，endA1突變有利于質粒DNA的穩(wěn)定。[cpn10cpn60 Gent^R]的存在使ArcticExpress (DE3) pRARE2可以表達適應低溫的伴侶蛋白Cpn10和Cpn60（來自嗜冷菌—Oleispira antarctica）。Cpn10和Cpn60伴侶蛋白在4-12℃表現(xiàn)出較高活性，在ArcticExpress(DE3) pRARE2細胞中表達時，可降低重組蛋白包涵體的形成，增加可溶重組蛋白的表達量及生物活性，比傳統(tǒng)的原核表達伴侶蛋白GroEL、GroES等具有更加優(yōu)異的促融能力。同時，pRARE2質?？裳a充大腸桿菌缺乏的7種稀有密碼子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA和CGG)對應的tRNA，提高外源基因的表達水平。

青旗生物生產的ArcticExpress (DE3) pRARE2感受態(tài)細胞經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率達10⁸cfu/μg DNA。

操作方法

1. ArcticExpress (DE3) pRARE2感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的質粒，并用手bo打EP管底混勻，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的LB培養(yǎng)基上（（平板中務必同時含有34ug/ml的氯霉素，40ug/ml的慶大霉素和轉化質粒本身的篩選抗生素；若質粒濃度較高，也可稀釋后涂板，務必保證能在平板上挑到單克隆菌落）。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

ArcticExpress (DE3) pRARE2感受態(tài)細胞

IPTG配制：

    Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside)

    by dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

注意事項

1. 感受態(tài)細胞盡量在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株攜帶 pRARE2質粒，除復蘇培養(yǎng)基為無抗生素外，其余所用培養(yǎng)基、培養(yǎng)液均應含有34 µg/mllv霉素、40ug/ml的qing大霉素，以防質粒丟失。

3. 為獲得需要量的蛋白，誘導時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。

4. ArcticExpress (DE3) pRARE2感受態(tài)細胞具有四環(huán)素、慶大霉素、氯霉素抗性，不可用于具有四環(huán)素、慶大霉素、氯霉素抗性質粒的轉化。