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Ar.A4電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

Ar.A4電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

簡(jiǎn)要描述：Ar.A4電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞
發(fā)根農(nóng)桿菌是根瘤菌科（Rhizobiaceae）農(nóng)桿菌屬（agrobacterium）的一種革蘭氏陰性土壤細(xì)菌，它能夠感染大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個(gè)別裸子植物。Ar.A4發(fā)根農(nóng)桿菌菌株含有農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒，具有廣泛的宿主范圍（玉米，煙草，胡蘿卜，甘草等），同時(shí)具有卡那霉素抗性。

更新時(shí)間：2022-01-21

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

瀏覽次數(shù)：713

詳情介紹
品牌其他品牌貨號(hào)BFNC86112
規(guī)格10x100ul/50x100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途僅用于科研應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

Ar.A4電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞


產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86112-01(10×100ul)/BFNC86112-02(50×100ul)
Ar.A4 Electro：                                                          50μl/支
pK7WGF2（control vector，10ng/μl )                         10μl
保存條件(保質(zhì)期)：                                       -80℃（12個(gè)月）


基因型

Agrobacterium rhizogenes(kanR  ) Ar A4 Ri(agropine  type)



產(chǎn)品說(shuō)明

發(fā)根農(nóng)桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農(nóng)桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細(xì)菌，它能夠感染大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個(gè)別裸子植物。Ar.A4發(fā)根農(nóng)桿菌菌株含有農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒，具有廣泛的宿主范圍（玉米，煙草，胡蘿卜，甘草等），同時(shí)具有卡那霉素抗性。

青旗生物生產(chǎn)的Ar.A4發(fā)根農(nóng)桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)特別適用于大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化：經(jīng)pK7WGF2質(zhì)粒 (size:11876 bp)檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>105 cfu/μg DNA；經(jīng)pK7WGF2-ZH質(zhì)粒（size:40 kb）檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)5×103 cfu/μg DNA。


常規(guī)操作方法

1. 0.1 cm電擊杯和杯蓋從儲(chǔ)存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘，待其瀝干水分，正置5分鐘，使乙醇充分揮發(fā)，待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中，壓實(shí)冰面，電極杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5分鐘充分降溫。

2. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)插入冰中5分鐘，待其融化，加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA（體積不大于6ul，盡量用試劑盒抽提，雙蒸水溶解；轉(zhuǎn)化效率較高，*使用前盡量做預(yù)實(shí)驗(yàn)確定所加質(zhì)粒的量），用手bo打管底混勻，立即插入冰中，用200 μl槍頭將感受態(tài)-質(zhì)粒混合物快速移到電擊杯中，蓋上杯蓋，空管保留待用。

3. 啟動(dòng)電轉(zhuǎn)儀，設(shè)置參數(shù)：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此參數(shù)為Biorad 推薦，使用者也可按所用電轉(zhuǎn)儀推薦的protocol操作），將電擊杯從冰中拿出，吸水紙吸干外表面水份，快速放入電轉(zhuǎn)槽中，啟動(dòng)電擊，電擊完成快速插入冰中，加入1 ml無(wú)抗生素的TY，并轉(zhuǎn)移到感受態(tài)空管中，28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時(shí)。

4. 6000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的TY平板上，倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天


Ar.A4電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞


● 農(nóng)桿菌相關(guān)抗生素配方：


抗生素

 配方

 原液

 工作液

羧芐青霉素 (carb)

 雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌

50 mg/ml

50 μg/ml

硫酸卡那霉素 (kan)

 雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌

50 mg/ml

50 μg/ml

鏈霉素 (strep)

 雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌

10 mg/ml

50 μg/ml

利福平 (rif)

DMSO溶解，0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌

10 mg/ml

20 μg/ml

慶大霉素 (gent)

 雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌

20 mg/ml

40 μg/ml

氯霉素（cam）

 無(wú)水乙醇溶解，0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌

34 mg/ml

34 ug/ml


常用農(nóng)桿菌抗性： (R：抗；S：敏感。)

農(nóng)桿菌菌株

羧芐青霉素(carb)

鏈霉素(strep)

利福平(rif)

氯霉素(cam)

硫酸卡那霉素(kan)

Ar A4

S

S

S

S

R

MSU440

S

R

S

S

S

Ar Qual

S

R

S

R

S


● TY配方（1L）：

Tryptone                5g

Yeast extract          3g

補(bǔ)水到1L體積，*溶解后，121度、20分鐘高溫滅菌

配制1M的氯化鈣水溶液，121度、20分鐘高溫滅菌

每1L 滅菌的TY液體營(yíng)養(yǎng)液中加入10ml 無(wú)菌的1M氯化鈣水溶液即可。

若配制TY固體培養(yǎng)基，則加入15g 瓊脂粉。


注意事項(xiàng)

1. 加入質(zhì)粒時(shí)體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10；質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機(jī)物污染，轉(zhuǎn)化效率急劇下降；質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn)化效率下降一個(gè)數(shù)量級(jí)。

2. 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞中不可混入氣泡，轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。

3. 平板上陽(yáng)性克隆密度過(guò)大時(shí)，由于營(yíng)養(yǎng)不足，陽(yáng)性克隆生長(zhǎng)變慢，菌落變小，為了獲得大的菌落，應(yīng)減少質(zhì)粒用量或終用于涂板的菌量。

4.  Ar.A4具有卡那霉素抗性，不可用于具有卡那霉素抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。




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