Ar.A4克隆感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86119-01(10×100ul)/BFNC86119-02(50×100ul)/BFNC862119-03(100×100ul)
Ar.A4：                                                                      100μl/支
pK7WGF2（control vector，10ng/μl )                            10μl
保存條件(保質(zhì)期)：                                         -80℃（12個(gè)月）

基因型

Agrobacterium rhizogenes(kanR  ) Ar A4 Ri(agropine  type)

產(chǎn)品說(shuō)明

發(fā)根農(nóng)桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農(nóng)桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細(xì)菌，它能夠感染 大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個(gè)別裸子植物。Ar.A4發(fā)根農(nóng)桿菌菌株含有農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒，具有廣泛的宿主范圍（玉米，煙草，胡蘿卜，甘草等），同時(shí)具有卡那霉素抗性。

青旗生物生產(chǎn)的Ar.A4感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pK7WGF2質(zhì)粒（壯觀霉素抗性）檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率>104 cfu/μg DNA。

常規(guī)操作方法

1.取-80℃保存的Ar A4發(fā)根農(nóng)桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化，處于冰水混合狀態(tài)時(shí)插入冰中。

2.每100μl感受態(tài)加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA（轉(zhuǎn)化效率較高，*使用前盡量做預(yù)實(shí)驗(yàn)確定所加質(zhì)粒的量），用手快速、劇烈bo打管底混勻或用槍吹吸混勻，依次放于冰中靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。

3. 冰浴中拿出放室溫，加入700μl 無(wú)抗生素的TY 液體培養(yǎng)基，于 28℃振蕩培養(yǎng) 2小時(shí)。

4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的 TY平板上，倒置放于 28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2-3 天

● 農(nóng)桿菌相關(guān)抗生素配方：

常用農(nóng)桿菌抗性： (R：抗；S：敏感。)

● TY配方（1L）：

Tryptone                5g

Yeast extract          3g

補(bǔ)水到1L體積，*溶解后，121度、20分鐘高溫滅菌

配制1M的氯化鈣水溶液，121度、20分鐘高溫滅菌

每1L 滅菌的TY液體營(yíng)養(yǎng)液中加入10ml 無(wú)菌的1M氯化鈣水溶液即可。

若配制TY固體培養(yǎng)基，則加入15g 瓊脂粉。

注意事項(xiàng)

1. 加入質(zhì)粒時(shí)體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10；質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機(jī)物污染，轉(zhuǎn)化效率急劇下降；質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn)化效率下降一個(gè)數(shù)量級(jí)。

2. 混勻質(zhì)粒時(shí)應(yīng)用手指快速bo打管底或用槍吹吸混勻，務(wù)必使質(zhì)?？焖佟⒕鶆蚍稚㈤_(kāi)，與感受態(tài)細(xì)胞充分接觸。轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。

3. 平板上陽(yáng)性克隆密度過(guò)大時(shí)，由于營(yíng)養(yǎng)不足，陽(yáng)性克隆生長(zhǎng)變慢，菌落變小，為了獲得大的菌落，應(yīng)減少質(zhì)粒用量或降低涂板的菌量。

4. Ar.A4具有卡那霉素抗性，不可用于具有卡那霉素抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。